Радиоимунологичният анализ (RIA) е вид имунологичен анализ или радиоимунометричен метод, който се основава на специфичното образуване на комплекси антиген-антитяло (Ag-Ac). което му придава голяма специфичност, съчетана с чувствителността на радиологичните методи (радиоактивни изотопи).

Радиоимунологичният анализ (RIA) се състои от лабораторна техника на клиничен анализ. Той използва радиоактивни изотопи, ин витро е, т.е. взема се кръв от пациента и се изследва за вещества.

Целевият антиген е радиоактивно маркиран и се свързва със своите специфични антитела (трябва да се добави ограничено и известно количество от специфичното антитяло). Проба, напр. след това се добавя кръвен серум, за да започне конкурентна реакция на белязаните антигени в препарата и небелязаните антигени в серумната проба със специфичните антитела.

Конкуренцията за антителата ще освободи определено количество белязан антиген. Това количество е пропорционално на съотношението на белязан към небелязан антиген. След това може да се генерира крива на свързване, която позволява да се определи количеството антиген в серума на пациента.

Това е техника, родена през 60-те и 70-те години, водеща до голям напредък в ендокринологията. Това е много чувствителна техника, която измерва малки количества кръв.

Радиоимунологичният анализ (RIA) се основава на принципа на всички имунологични анализи, който е разпознаване на антиген, присъстващ в проба, чрез антитела, насочени срещу този антиген.

Това означава, че с нарастването на концентрацията на небелязан антиген, повече от небелязания антиген се свързва с антитялото, измествайки белязания вариант. След това свързаните антигени се отделят от несвързаните антигени и се измерва радиоактивността на свободните антигени, останали в супернатантата. Кривата на свързване може да бъде генерирана с помощта на известен стандарт, което позволява да се извлече количеството антигени в серума на пациента.

Радиоимунологичният анализ е стара техника за анализ, но все още е широко използван анализ и все още предлага ясни предимства по отношение на простота и чувствителност.

• Антисерум, специфичен за антигена, който ще се измерва
• Наличие на радиоактивно маркирана форма на антигена
• Метод, при който маркерът, свързан с антитялото, може да бъде отделен от несвързания маркер
• Уред за преброяване на радиоактивността

Обикновено се прилагат етикети 125-I, въпреки че са използвани и други изотопи като C14 и H3. Радиомаркираният антиген с висока активност (125-I) обикновено се приготвя чрез йодиране на чистия антиген при неговите тирозинови остатъци чрез хлорамин-Т или пероксидазни методи и след това отделяне на радиомаркирания антиген от свободния изотоп чрез гел филтрация или HPLC. Други важни компоненти на RIA са антиген-специфичното антитяло и чистият антиген за използване като стандарт или калибратор.

Прилагат се техники на двойно антитяло, въглен, целулоза, хроматография или твърда фаза за разделяне на свързания и свободния радиомаркиран антиген. Най-често използваната е техниката с двойни антитела, комбинирана с полиетилен. Свързаната или свободната фракция се отчита в гама брояч.

В същото време се генерира калибровъчна или стандартна крива с проби с известни концентрации на небелязаните стандарти. Количеството антиген в неизвестна проба може да се изчисли от тази крива.

Чувствителността може да се подобри чрез намаляване на количеството радиомаркиран антиген и/или антитяло. Чувствителността може да се подобри и чрез така наречената неравновесна инкубация. В този случай радиомаркираният антиген се добавя след първоначалната инкубация на антиген и антитяло.

Антитялото трябва да е специфично за изследвания антиген (други антигени не трябва да реагират кръстосано с антитялото). Ако се наблюдава някаква кръстосана реактивност, се препоръчва избор на различно антитяло или пречистване на антитялото от кръстосано реактивния антиген чрез афинитетна хроматография.

Gentaur