Много хора се чудят какво представляват наноантителата? Наноантителата са вид антитела, получени от камила, като са много по-малки от обичайните антитела, всяко от които е конгломерат от две тежки вериги и две тежки вериги. лигеркато, сложно нагънати и свързани със сложни захари. С други думи, наноантителата са малки рекомбинантно произведени антиген-свързващи VHH фрагменти, получени от тежковерижното IgG антитяло на алпака (HCAb).
Какво представляват наноантителата? | антитела тест
Домейнът VHH представлява най-малкият фрагмент от антитяло, необходим за специфично свързване към антиген с изключително висок афинитет.
Как мога да използвам наноантитела?
Накратко, почти всякаква форма!
Наноантителата се предлагат в различни формати. Те се повдигат срещу доста разнообразен набор от антигени, което ги прави много гъвкави инструменти, способни да се използват в различни ситуации.
Най-честите употреби на наноантитела са експерименти, с които вероятно вече сте запознати, като имунопреципитация или флуоресцентна микроскопия.
Има също няколко приложения, при които използването на наноантитела е осъществимо, но използването на конвенционално антитяло би било непрактично или невъзможно.
Разлика между наноантитела и традиционни моноклонални или поликлонални антитела
- По-последователен
- По-голям афинитет
- По-лесен за използване
Нанотелата се предлагат в различни формати, включително нано-капани, нано-бустери и Chromobodies®.
Какво е нано-капан?
Нано-капаните са нано-тела, които са били конюгирани с агароза или магнитни перли за улесняване на по-чисти, по-бързи и по-прости имунопреципитации.
Нано-капаните се предлагат в различни формати и са насочени към различни общи етикети, включително зелен флуоресцентен протеин (GFP), червен флуоресцентен протеин (RFP), Myc, GST и MBP.
Нано-капани за ДНК метилтрансфераза (Dnmt-1), p53 и PARP-1 също са налични за имунопреципитация на небелязани и ендогенно експресирани протеини.
Нано-капаните ви позволяват да извършвате IP експерименти с изключително висока производителност и без замърсяване с тежки или леки вериги на антитела.
Нано-капаните значително подобряват конвенционалните IP протоколи, ще видим някои подобрения:
- По-бързо (около половината от времето, необходимо за IP на антитяло)
- Почистващо средство (без замърсяване с антитела с тежка или лека верига)
- По-последователни (рекомбинантни реагенти за едно и също взаимодействие всеки път)
- По-висока производителност (пикомоларни до наномоларни константи на афинитет за GFP и RFP-traps®)
За да се улесни по-голямата гъвкавост в IP методологията, всички нано-капани се конюгират с агарозни зърна, феромагнитни зърна или агарозни/магнитни зърна.
Изследователи в САЩ и Западна Европа получават капаните GFP и RFP ден след покупката от антитела онлайн.
Какво е нано-бустер?
Нано-бустерите използват силата на нано-тялото, за да подобрят, модулират или реактивират слабия флуоресцентен сигнал на флуоресцентен протеин.
Нано-бустерът се състои от нано-тяло, насочено към GFP или RFP и конюгирано с ултра-ярка ATTO боя.
Естествените флуоресцентни свойства на GFP са подобрени от ултра-яркото багрило ATTO-488, свързано с ABIN509419 GFP-Booster®.
Боите ATTO бяха специално избрани за използване с Nano-Booster поради техния изключително ярък сигнал, най-добрата в класа си фотостабилност и тясното отместване на Стокс.
Техники за изображения от следващо поколение, като микроскопия със супер разделителна способност, изискват ярки, фотостабилни флуоресцентни сонди.
Нано-усилвателите могат да осигурят „усилването на сигнала“, необходимо за да направят флуоресцентни протеини като GFP ярки и стабилни за микроскопия със супер разделителна способност.
Какво е Chromobody®?
Chromobodies® са нови инструменти за вътреклетъчно флуоресцентно маркиране на живи клетки.
Chromobodies® са слети протеини, съдържащи нанотяло, насочено към вашия протеин, който ви интересува, и светещ, фотостабилен флуоресцентен протеин.
Тъй като нанотелата се произвеждат от рекомбинантна ДНК, можете да генерирате Chromobodies® директно, точно в клетката, която искате да маркирате. Без тромави, разочароващи или отнемащи време протоколи за фиксиране или етикетиране.
Просто започнете с подходящия плазмид Chromobody®, трансфектирайте го в съвместима клетъчна линия и използвайте устойчиво вътреклетъчно имуномаркиране в живи клетки.
Chromobodies® използва вашите собствени клетки, за да произведе нанотелата, които ще маркират вашия протеин, който ви интересува.
Не са необходими нито фиксиране, нито допълнителни стъпки за оцветяване. И накрая, вътреклетъчното имуномаркиране в живи клетки е жизнеспособна стратегия.
Структура на нанотела
Нанотелата се наричат още антитела с единичен домен или VHH антитела, защото се състоят само от един вариабилен домен (VHH) на тежката верига на антитялото. Нанотелата са пептиди с дължина приблизително 110 аминокиселини.
VHH домейните имат четири рамкови региона (FR) и три хиперпроменливи региона (HV) или CDR определящи комплементарността региони. CDRs или HVs имат висок дял на вариабилност на аминокиселини в една позиция и са регионите, участващи в свързването на антигена, тъй като те влизат в контакт с повърхността на антигена.
HHV има четири аминокиселинни замествания в областта FR2 на позиции 37, 44, 45 и 47. FR2 на конвенционалния VH няма тези замествания и участва във формирането на хидрофобния интерфейс с VL домейна.
Приложения на нанотела
Основните приложения, в които се изследват наноантителата, са лечението на човешки заболявания чрез взаимодействие със специфични токсични ензими или блокиране на молекулярни взаимодействия.
В областта на онкологията HHV се използват за нарушаване на молекулярните взаимодействия или лизиране на онкогенни клетки. За да убие раковите клетки, VHH се свързва с карциноембрионалния антиген, който служи като маркер за β-лактамаза, превръщайки нетоксичното пролекарство в лекарство, което е токсично за раковата клетка.
Биотехнологичното приложение на наноантитела е потенциално осъществимо, като един пример е антигенно маркиране в живи клетки чрез прилагане на специфични флуоресцентни наноантитела към ендогенни протеини.
Прочетете повече в нашия блог