В тази статия ще говорим в дълбочина за панела за маркери на Cluster of Differentiation (CD), Клъстер на диференциация. CD молекулите са маркери на клетъчната повърхност, които са много полезни за идентифицирането и характеризирането на клетъчната повърхност. Левкоцити и на различните левкоцитни субпопулации. Семинарът HLDA (Human Leukocyte Differentiation Antigens), който стартира през 1982 г., разработи номенклатурата на CD и оттогава поддържа списъка с маркери на CD. Първоначалната идея на номенклатурата на CD беше класификацията на много различни моноклонални антитела срещу повърхностни молекули на левкоцитни клетки, които са били генерирани от различни лаборатории по света.
Броят на CD маркерите нараства стабилно и е разширен за други типове клетки. Днес има повече от 320 DC групи, описани при хора.
Маркерите на клъстер на диференциация (DC) са особено полезни за идентифициране на левкоцитната популация чрез поточна цитометрия. Нашите страници с ресурси Общ протокол за поточна цитометрия и Какво е поточна цитометрия? предоставят кратко въведение в поточната цитометрия.
Голямото предимство на поточната цитометрия е, че позволява едновременно откриване на няколко маркера в една клетка едновременно. С модерен поточен цитометър 8 до 10 различни цвята могат лесно да бъдат измерени в проба, а най-модерните цитометри дори могат да измерват до 18 канала наведнъж.
Когато се използва поточна цитометрия за определяне на конкретна левкоцитна популация, често се използва комбинация от няколко клъстерни маркера за диференциация за определяне на субпопулация, тъй като единичен маркер обикновено не дефинира цялата популация.
Обикновено изследователите генерират стробиращи дървета, когато оценяват експерименти с поточна цитометрия.
Много показателен пример е разпространението на CD8. Въпреки че CD8 е най-известният маркер и съименник на CD8-позитивните цитотоксични Т клетки (CD8+), той също се експресира от естествени клетки убийци (NK клетки) и дентритни клетки (DC). Ако всички CD8+ клетки се отделят от левкоцитна популация в кръвна проба, отделената популация ще се състои от CD8+ Т клетки, NK клетки и кумулусни диференциращи клетки (DC).
В следващия експеримент беше определено съотношението на CD4+ Т хелперни клетки към CD8+ цитотоксични Т клетки. Първо, всички CD45+ клетки (общ левкоцитен маркер) бяха отделени от периферната кръвна проба (изход 1).
В следващия панел всички CD45+ клетки в изход 1 бяха блотирани, за да се определи тяхната CD3 експресия. CD3 е най-често срещаният Т-клетъчен маркер, който се експресира само върху Т клетки, а не върху други CD8+ клетки, като NK или DC клетки. Изборът на CD3+ клетки гарантира, че CD3- клетките не се броят като CD8+ Т клетки, а CD8+ клетки (напр. NK или DC клетки).
CD3+ Т клетъчната популация може допълнително да се диференцира в цитотоксични CD8+ Т клетки и CD4+ Т хелперни клетки, както е показано в панел 2, където CD3+ клетките от порта 2 са блотирани за CD4 и CD8 експресия. CD4+ CD8- помощните Т клетки са в горния ляв квадрант, а CD4-CD8+ цитотоксичните Т клетки са показани в долния десен квадрант на панел 3.
Ако е необходимо, изследовател, който се интересува от различни Т хелперни популации, като TH1, TH2, TH9, TH17 и Treg, ще оцвети съответните екстра- или вътреклетъчни маркери на тези субпопулации.
Пример за това как CD маркерите се използват за определяне на клетъчни популации в поточна цитометрия. Изображението показва Gating дърво на CD4+ и CD8+ Т клетки. В левия панел левкоцитите (CD45+ клетки) са групирани в порта 1. В средния панел са показани само клетки от порта 1, които са всички левкоцити в пробата. В този панел Т-лимфоцитите (CD3+) са затворени в порта 2. Десният панел показва CD3+ Т-клетки и отделя CD4+ и CD8-Т хелперни клетки (горен ляв квадрант) и C8+ и Cd4-цитотоксични клетки (долен десен панел). С любезното съдействие на д-р F.M. Хес, лаборатория Boisvert, JABSOM, Хавайски университет.
Прочетете повече в нашия блог